导言

紫外可见分光光度计在药厂有着广泛的应用，根据药典通则0401《紫外-可见分光光度法》规定，企业需要定期校验紫外—可见分光光度计，校验内容主要包括了波长准确度、吸光度准确度和杂散光三个检验项目，有些客户自己校验时会失败，而这三个项目中又以吸光度准确度测试失败率最高。

药厂小伙伴一般是使用重铬酸钾溶液校验紫外可见分光光度计，准确称量和配制一般难不住大家，但是有些小细节如果不注意会导致校验的失败，下面介绍一下吸光度准确度测试的注意点：

01实验室温度

药典中并没有明文规定校验时的实验室温度，正常情况下校验应该是在20℃下进行的，那么温度对溶液的吸光度有影响吗？根据《JJG 178紫外可见近红外分光光度计》的数据，60mg/L重铬酸钾溶液在235nm下，10℃时透过率为18.0%换算为吸收系数是124.1，而30℃时透过率为18.3%换算吸收系数为122.9，而235nm处允许的吸收系数为123.0-126.0，在30℃时本身就已经不满足校验要求了，所以温度这一点一定要特别注意。

02比色皿的使用

实验需要使用洁净的比色皿，对于有污垢的比色皿可以使用洗液浸泡，确保表面无划痕。按照一般的实验要求，使用待测溶液润洗三次以上就可以认为消除了比色皿残留溶剂的影响，而实际上在进行仪器校验时，润洗的要求会高很多，根据实验，进行6次以上的润洗可以比较可靠的保证润洗效果。同时由于比色皿两个通光面的光学性能不一定完全一致，在使用比色皿时，要注意调零和测试时比色皿通光面的方向不能改变。

03比色皿的选择

目前的紫外可见分光光度计都是双光路的仪器，本身可以消除参比光路和样品光路的皿差，所以大家使用时并没有特别注意比色皿的选择，但是进行仪器校验时，比色皿通光面材料的不均匀性、比色皿本身透过率的误差、比色皿尺寸的误差等都会导致校验不通过，建议使用质量较好配对的比色皿（比色皿配对要求可参考《JJG 178紫外可见近红外分光光度计》4.10吸收池的配套性）。

04比色皿架

比色皿架起到固定比色皿的作用，而对于一些使用时间比较久的仪器，比色皿架的定位簧片（下图所示）已经老化了，起不到固定比色皿的作用，这样在测试时会导致光通过比色皿的不同位置，将比色皿本身不同位置透过率的误差带入到结果中，在校验时也需要注意这个影响。

05试剂

重铬酸钾有不同的试剂等级，建议选用优级纯或者基准级试剂，以避免由于试剂杂质影响导致计量不通过。重铬酸钾保存时保持密封、干燥以防受潮，而且保存和配制的时候尽量避光。

另外如果具备条件，建议考虑直接购买具有证书的配制好的重铬酸钾标准溶液，避光保存，开封后四小时内使用，这样可以消除试剂和配制带来的影响。

以上就是紫外可见分光光度计吸光度准确度校验时容易忽视的一些小细节，把握好这些小细节，同时再配以岛津一流的分光光度计，大家在紫外校验的路上一定能顺利达到目标。