黄曲霉毒素（Aflatoxins, AF）是一类由黄曲霉和寄生曲霉产生的代谢产物，具有诱发人体致畸、致癌、致突变的作用，主要的污染物有黄曲霉毒素B1, B2, G1, G2。中药材大多以天然植物为基源，在储存不当或因其他外界条件影响时，易受霉菌污染产生黄曲霉毒素。因此对中药材进行黄曲霉毒素的高效便捷检测是十分有必要的。

 

       2.仪器、试剂及耗材

       仪器

       Raykol Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪

       Raykol Auto EVA-60 全自动平行浓缩仪

       Raykol AH-30 全自动均质器

       Raykol Auto Prep 200 全自动液体样品处理工作站

       高效液相色谱（HPLC）：Agilent 1200

       质谱检测器 (MS)：Agilent 6430

       耗材

       黄曲霉毒素免疫亲和柱

       试剂

       缓冲液：称取25 g氯化钠、5 g碳酸氢钠溶于水中，加入0.1 mL吐温-20，用水稀释至1000 mL即得淋洗缓冲液。

       使用Auto Prep 200全自动液体样品处理工作站配制黄曲霉毒素混合标准工作液。

 

       3.样品提取与前处理

       陈皮、人参、当归试样前处理

       准确称取15 g试样于120 mL离心管中，加入3 g氯化钠及75 mL甲醇-水溶液（7:3，V/V），12000转/分钟搅拌速度下均质2 min，离心5 min（转速4000 r/min）。准确量取15 mL上层提取液于50 mL容量瓶中，用水定容、取30 mL至50 mL离心管中, 离心10 min（转速4000 r/min），最后准确移取20 mL上清液至80 mL玻璃上样管，待净化用。

       净化方法

      净化过程采用黄曲霉毒素免疫亲和柱进行富集净化，具体方法如下：

       清洗样品通道：用甲醇清洗；

       上样：采用2 mL/min的流速进行精确上样20 mL；

       淋洗：采用缓冲液和纯水进行淋洗小柱；

       气推：用60 mL空气将水挤出免疫亲和柱；

       洗脱：以0.5 mL/min的速度用甲醇进行洗脱，开始收集溶液；

       气推：将柱子里溶液用空气推出，收集溶液。

       将收集液用甲醇定容至2 mL，混匀后过0.22 µm滤膜用液质检测。

 

       4.液质联用色谱图

 

       5.样品测试

       基质标准工作曲线

       选择定量离子的峰面积作为纵坐标，浓度作为横坐标，做相关曲线，曲线为线性回归，各点权重相等，拟合出工作曲线，要求R2>0.99。

       基质加标回收实验

       在陈皮、人参、当归3种常见样品基质中添加水平为1.8 μg/kg的黄曲霉毒素G2、B2和6.0 μg/kg的黄曲霉毒素G1、B1进行加标回收验证。

 

       6.总结

       A.提取液需加入水进行稀释、定容至50 mL后才可进行净化，以防止过多的有机溶剂使免疫亲和柱失活。

       B.在人参和当归的净化过程中，如采用20 mL水作为淋洗液，其加标回收率为70~80%；而将10 mL的缓冲液和10 mL的纯水作为淋洗液时，可除去免疫亲和柱上残留的色素和基质，从而提高回收率。

       C.进行洗脱时甲醇的过柱流速控制在1滴/s为宜。洗脱效果不佳时，可采取让甲醇浸泡免疫亲和柱后再加以洗脱。

       D.由于黄曲霉毒素在紫外光照射下不稳定，因此在实验过程中应避免紫外光和太阳光的照射。

 

       7.解决方案优势

       通过高通量全自动固相萃取仪进行净化和富集，能自动化进行免疫亲和柱自动脱帽和样品上样、淋洗和洗脱等过程，8种溶剂可选，6个样品通道同时运行，能连续、批量处理多样品，实现高通量、自动化固相萃取过程。

       整体解决方案可实现样品快速高效处理，提高工作效率。同时自动化前处理解决方案可解放实验人员双手，也避免有机溶剂的毒害。