地西泮别名安定、苯并二氮卓、苯甲二氮卓，主要用于人和动物镇定催眠及癫痫的治疗。由于，地西泮添加到饲料中可以提高动物的生长速度和减少饲料用量，故部分养殖企业为谋取更多效益，在饲料中非法添加地西泮，我国农业部与质量监察部门已经严格禁止在饲料中添加地西泮。地西泮具有蓄毒性，在饲料中长期添加，会导致其在肌肉组织中富集，从而进一步危害消费者健康，所以建立一种高效、快速的定量流程及检测方法尤为重要。本文使用SPE1000全自动固相萃取系统对饲料中的地西泮进行固相萃取富集，用高效液相色谱仪进行检测。

       本文参考《T/CFIAS003-2019 饲料中地西泮的测定高效液相色谱法》采用SPE1000全自动固相萃取系统，测定地西泮的回收效果，实验证明，地西泮回收率在86.8%~99.4%之间，重现性RSD为5.9 %，回收率和重现性良好，说明SPE1000全自动固相萃取系统可靠、稳定，适用于饲料中的地西泮样品前处理。

 

       1、实验过程

       1.1仪器与试剂

 

       SPE1000全自动固相萃取系统（莱伯泰科公司）；

 

       LC600高压高效液相色谱仪（莱伯泰科公司）；

       地西泮，1000mg/L，坛墨质检；

       甲醇（色谱纯）；

       甲酸（分析纯）；

       氨水（分析纯）；

       PCX混合型阳离子交换柱，（60mg/3mL莱伯泰科）；

       实验用水：超纯水。

 

       1.2 标准工作液的配置

       取1mL地西泮标品于10mL容量瓶中，甲醇定容，配置成浓度为100μg/mL的标准储备液。

       取20μL 的标准储备液，用甲醇定容到1mL，配制成2 μg/mL标准工作液。

 

       1.3实验方法

       1.3.1 样品制备

       将饲料样品打碎，称取2.0g样品，加入400μL的标准工作液，使饲料中地西泮的加标浓度为0.4mg/kg，加入20mL乙腈，涡旋5min，超声20min，5000rad/min离心10min,取5mL上清液,待固相萃取处理。

       同时做样品空白。

       1.3.2 固相萃取及浓缩

       1.3.3 HPLC测定水中地西泮

       色谱柱：C18，5μm，4.6nm*150mm；

       波    长：230nm；

       流    速：1.0mL/min ；

       进样量：20μL；

       流动相：甲醇：水=65:35V/V

 

       2、实验结果

       2.1  地西泮色谱图

       2.1.1地西泮标品色谱图

       2.1.2饲料中地西泮加标样品色谱图

       2.1.3饲料中地西泮样品色谱图

       2.2 HPLC测定饲料中地西泮回收率

 

       3、实验结论

       1、254nm和230nm的波长均可检测到地西泮，但地西泮在230nm波长下，信号响应最高。

       2、SPE1000全自动固相萃取系统净化的样品，其回收率和重现性良好，工作效率高，可应用于此类样品的前处理方法中。

 

       4、参考标准

       T/CFIAS003-2019饲料中地西泮的测定高效液相色谱法