地西泮别名安定、苯并二氮卓、苯甲二氮卓，是一种中枢精神系统镇定剂，主要用于人和动物镇定催眠及癫痫的治疗。近年来，地西泮在临床的应用越来越广泛，此类药物在中毒药物中居首位，中毒和疑似中毒的病例常见，所以建立一种高效、快速的定量流程及检测方法尤为重要。本文使用SPE1000全自动固相萃取系统对血清中的地西泮进行固相萃取、富集，用高效液相色谱仪进行检测。

       本文参考《SPE-HPLC/MS/MS法检测人唾液中的地西泮及其代谢产物》采用SPE1000全自动固相萃取系统，测定地西泮的回收效果，实验证明，地西泮回收率在90.5%~98.1 %之间，重现性RSD为2.7 %，回收率和重现性良好，说明SPE1000全自动固相萃取系统可靠、稳定，适用于血液中的地西泮样品前处理。

       1、实验过程

       1.1仪器与试剂

       SPE1000全自动固相萃取系统（莱伯泰科公司）；

       LC600高压高效液相色谱仪（莱伯泰科公司）；

       LC600高压高效液相色谱仪（莱伯泰科公司）；

       地西泮，1000mg/L，坛墨质检；

       甲醇（色谱纯）；

       乙酸铵（分析纯）：配制成0.2mol/L，PH=6的水溶液；

       C18固相萃取柱（60mg/3mL莱伯泰科）；

       实验用水：超纯水。

  

       1.2 标准工作液的配置

       取1mL地西泮标品于10mL容量瓶中，甲醇定容，配置成浓度为100μg/mL的标准储备液。

取20 μL标准储备液，用甲醇定容到1mL，配制成2μg/mL标准工作液。

 

       1.3实验方法

       1.3.1 样品制备

       取1mL血液，加入100 μL的标准工作液，混匀，使血样中地西泮的加标浓度为200 μg/L，用水稀释到5 mL，涡旋5min，5000 rad/min离心10 min。取全部上清液，待固相萃取处理。

       同时做样品空白。

 

       1.3.2 固相萃取及浓缩

       进行SPE1000方法编辑，并加载方法到相应通道，进行样品的固相萃取。收集洗脱液到收集瓶中，氮吹浓缩至1mL以下，用甲醇定容至1mL，待测。

 

       1.3.3 HPLC测定水中地西泮

       色谱柱：C18，5μm，4.6mm*150mm；

       波    长：230nm；

       流    速：1.0mL/min；

       进样量：20μL；

       流动相：甲醇：水=65:35V/V

 

       2、实验结果

       2.1  地西泮色谱图

       2.1.2血液中地西泮加标样品色谱图

       2.1.3血液中地西泮样品色谱图

 

       2.2 HPLC测定血液中地西泮回收率

       HPLC测定血液中地西泮回收率计算结果如下表，萃取富集后的回收率在90.5%~98.1 %之间，重现性RSD为 2.7%。

 

      3、实验结论

       1、254nm和230nm的波长均可检测到地西泮，但地西泮在230nm波长下，信号响应最高。

       2、SPE1000全自动固相萃取系统净化的样品，其回收率和重现性良好，工作效率高，可应用于此类样品的前处理方法中。

 

       4、参考标准

       SPE-HPLC/MS/MS法检测人唾液中的地西泮及其代谢产物

       高效液相色谱法测定 地西泮中毒患者血浆与血清中地西泮浓度

       固相萃取—反相高效液相色谱法同时测定人血清中地西泮及氯硝西泮