本文参照2020版《中国药典》2341通则农药残留量测定法新增第五法《药材及饮片（植物类）中禁用农药多残留测定法》中的固相萃取法，使用乙腈对金银花试样进行均质提取，经盐析和离心后，GC-MS/MS组化合物采用GCB/NH2柱净化，LC-MS/MS组化合物采用HLB柱净化，最后上机检测。

       本方法采用睿科AH-30均质器进行批量提取，提取液经MPE高通量真空平行浓缩仪进行浓缩，然后用Fotector Plus全自动固相萃取仪对提取液进行净化，最后再用MPE高通量真空平行浓缩仪对洗脱液进行浓缩，实现了金银花前处理过程全流程自动化。在40 ug/kg的加标水平下GC-MS/MS法中33种化合物的回收率在71.5-118.4%之间，RSD值小于10%；在20 ug/kg的加标水平下LC-MS/MS法中30种化合物的回收率在72.1-120.5%之间，RSD值小于10%，满足实验要求。

 

       仪器

       Raykol AH-30全自动均质器

       Raykol MPE-16高通量真空平行浓缩仪

       Raykol Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪

       Agilent 1290+6470高效液相色谱/质谱联用仪

       Agilent 8890+7000D气相色谱/质谱联用仪

 

       试剂

       乙腈：HPLC级，甲苯：HPLC级

       GC-MS/MS法33种农药混合标准储备液：40 μg/mL

       LC-MS/MS法30种农药混合标准储备液：20 μg/mL

       GC-MS/MS法内标使用液：磷酸三苯酯 0.1 μg/mL

       GCB/NH2柱（500 mg/6 mL）

       HLB柱（200 mg/6 mL）

 

       样品前处理

       1  准确称取5 g试样（精确至0.01 g）于100 mL离心管中，加入1 g氯化钠后立即摇散，加入50 mL乙腈

       2  用Raykol AH-30全自动均质器在12000 r/min的搅拌速度下均质2 min，转速4000 r/min下离心5 min

       3  将上清液倒入浓缩杯中，残渣再加入50 mL乙腈，继续均质1 min，离心5 min

       4 合并两次提取液，在Raykol MPE-16高通量真空平行浓缩仪中浓缩至3~5 mL

       5  放冷的样液转移至10 mL容量瓶中，用乙腈多次润洗浓缩杯并转移至容量瓶中，最终用乙腈定容至刻度

       6  GC-MS/MS法：量取上述溶液 2mL至15mL上样管中，以石墨化碳氨基复合固相萃取小柱（500 mg，6ml）为净化柱，先用10 mL乙腈-甲苯（3:1）活化小柱，弃去流出液，之后以1 mL/min的速度上样，再用2×3 mL的乙腈-甲苯（3:1）清洗样品瓶并过柱，最后用14 mL的乙腈-甲苯（3:1）洗脱，收集以上流出液，用MPE将洗脱液浓缩至近干，用乙腈转移并稀释至2 mL，混匀。精确移取1 mL上述定容液，精密加入0.3 mL磷酸三苯酯内标溶液，过0.22 μm滤膜后上气相色谱/串联质谱仪测定。

       7  LC-MS/MS法：量取直接提取法制备的溶液3mL，通过HLB柱净化，收集全部流出液，混匀。精确移取1 mL上述净化液，精密加入0.3 mL水后过0.22 μm滤膜，上高效液相色谱/串联质谱仪测定

 

       本解决方案操作方便，提取、净化和浓缩效率高、回收率好。AH-30全自动均质器可自动进行中药样品的均质，且具备刀头清洗，无需人员值守，避免有机溶剂毒害，操作简单、便捷；MPE真空平行浓缩仪采用数字型的真空控制系统，能精确、实时地检测真空度，避免样液中目标物在过低真空度下损失，同时采用水浴加热和平稳的圆周震荡模式，保证样品的平行性和可靠性。Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪在对金银花中多农残进行固相萃取净化时，使用高精度注射器和十二通阀切换等动作，实现了活化、上样、淋洗、洗脱整个固相萃取过程的全自动化，6通道同时运行，8种溶剂可选，3种排废可选，还带有自动清洗样品瓶的功能来防止目标化合物在瓶壁上的残留，实现全自动化过程的同时保证了回收率，真正实现中药样品的大批量高效快速的前处理。